火影忍者这部动漫中，大蛇丸经历了两次死亡。第一次是在第334集，佐助杀死了他。在剧情中，大蛇丸的真正身份得到了揭示，他不断袭击佐助，但佐助开启了咒印的力量，成功斩杀了许多小蛇。对于曾经凌辱他的大蛇丸来说，他已经不再是威胁。
大蛇丸曾经试图通过研究转生之术来占有鼬的身体，但最后失败了。由于这些经历，他被迫选择对年幼的佐助下手，因为佐助只是一只刚刚学会飞行的雏鸟。如今，佐助已经成长为一只猎鹰，开始了他的复仇之路。在第358集，佐助回到了他曾经的家，看到父母死后的血迹，他无法控制自己的情绪，怀着对鼬的憎恨获得了强大的力量。如今，复仇的时刻终于到来了。
随着一声雷鸣，佐助用他自创的忍术麒麟将鼬击倒。然而，鼬并没有死去，反而展现了他的必杀技-须佐能乎。面对须佐能乎的威力，佐助已经没有多余的查克拉能够与之抗衡。就在这时，之前被佐助吞噬的大蛇丸再次出现，但可惜的是，鼬的十拳剑迅速将他封印。佐助为了保命所使用的小白蛇也被鼬的天照烧死了。
