T4DNA连接酶是一种依赖ATP的酶，它能够催化两条DNA双链上相邻的5′磷酸基和3′羟基之间的连接，形成磷酸二酯键。它可以连接双链DNA的平末端、相容黏末端以及其中的单链切口。在分子生物学领域，T4DNA连接酶有着广泛的应用。
另外还有一种称为热稳定DNA连接酶的酶，它是从嗜热高温放线菌中分离纯化得到的。这种酶能够在高温下催化两条寡核苷酸探针的连接反应。热稳定DNA连接酶也被称为DNA黏合酶，它在分子生物学中扮演着特殊而关键的角色，即将两条DNA黏合成一条。不论是双股还是单股DNA的黏合，DNA黏合酶都能够通过形成磷酸酯键将DNA的3’端尾端与5’端前端连接在一起。
