在使用高压灭菌锅之前，首先要将水加到水位线。接下来，将需要灭菌的培养基、蒸馏水或其他容器放入灭菌锅内，然后关闭锅盖并检查排气阀和安全阀的状态。接着打开电源，检查参数设置是否正确，然后按下“工作”键，灭菌锅开始工作。在达到105摄氏度时，底部排气阀门会自动关闭，然后压力开始上升。当温度上升至121摄氏度时，灭菌锅会再次自动放气，并开始记时。一般来说，培养基的灭菌时间为20分钟，蒸馏水的灭菌时间为30分钟。当达到规定的灭菌时间后，关闭电源并缓慢打开放气阀。在压力指针降至0且放气阀没有蒸汽排出时，方可打开锅盖。
